Guest TANG Posted January 10, 2023 Report Share Posted January 10, 2023 亲爱的基督徒 ，我的英语很差，我希望你能理解我的问题。 我用4种重组蛋白对小鼠进行了免疫，并在第三次免疫后2周取脾脏以检测IL-4和γ-IFN，但我不知道如何添加兴奋剂，每种蛋白质多少微克是合适的？ Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Christian@mabtech.com Posted January 12, 2023 Report Share Posted January 12, 2023 你好，Tang，欢迎来到我们的论坛！ 在做ELISpot检测抗原特异性反应之前，最好做几次预实验来确定每孔细胞数和抗原浓度。下面这几点比较重要： - 确保使用 Mabtech 的预包被 ELISpot 板。 当然可以选择自己包被，但使用预包被板的话可以保证预实验及后续实验的顺利。 - 应在优化的实验条件下分离脾细胞，并在适当的细胞培养基中稀释。 我们的新网站上有教程： https://www.mabtech.com/knowledge-hub/isolation-freezing-and-thawing-splenocytes - 在细胞培养基中以不同浓度稀释抗原，然后将它们加到 ELISpot 板中进行滴定，以确定最佳刺激条件。 大多数抗原在 2 µg/ml 的浓度效果很好，但我建议尝试 4 µg/ml、2 µg/ml、1 µg/ml 和 0.5 µg/ml 的梯度以确定最佳浓度。 每种条件做三个复孔，以便获得统计上有意义的结果。 - 滴定每孔脾细胞数。 通常情况下，抗原特异性T细胞 ELISpot应种每孔20到25万细胞。 然而，某些抗原可能需要更多的细胞；而有些抗原引起的反应非常剧烈，以至于每孔20到25万细胞会造成斑点融合。 因此在预实验测试抗原时，需通过每孔40万、20万、10万细胞来滴定。 - 不少细胞因子通常在孵育过夜后就可以得到良好结果，比如IFN-γ 。但某些抗原需要孵育两天才能看到明显的抗原特异性反应。 对于 TH2 细胞因子（如 IL-4）尤其如此。 因此，请在预实验中尝试孵育20和40小时来进行比较。 祝好！ 克里斯蒂安 Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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